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CO2培養箱的滅菌技術

更新時間:2018-06-28點擊次數:2742

二氧化碳培養箱是在普通培養的基礎上加以改進,主要是能加入CO2,以滿足培養微生物所需的環境。主要用于組織培養和一些特殊微生物的培養。二氧化碳培養箱廣泛應用于細胞、組織培養和某些特殊微生物的培養,常見于細胞動力學研究、哺乳動物細胞分泌物的收集、各種物理、化學因素的致癌或毒理效應、抗原的研究和生產、培養雜交瘤細胞生產抗體、體外授精(IVF)、干細胞、組織工程、藥物篩選等研究領域。
二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境如穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置。
在生物活體內,生物體有自身的免疫系統保護細胞或組織,但是在體外培養時,沒有任何保護自己的免疫屏障。對于二氧化碳培養箱的基本參數溫度、CO2和濕度,大多數培養箱都能滿足研究實驗的需要。然而,針對培養過程中面臨的各種污染源,各品牌二氧培養箱的控制方式和效果不盡相同,因此細胞體外培養中zui大的威脅實際上是污染問題。


對于細胞來說,非常理想的培養環境同樣也適合這些污染物的生存,培養箱本身是不會辨別的,而細胞培養中大部分時間里細胞都是位于培養箱內,因此箱體內能否抑菌或滅菌非常關鍵!
二氧化碳培養箱中的主要污染源:細菌、真菌(霉菌和酵母菌)、病毒、支原體、非同種細胞。
支原體:支原體污染后,因為它們不會使細胞死亡可以與細胞長期共存,培養基一般不發生渾濁,細胞無明顯變化,外觀上給人以正常感覺,實則細胞已經受到多方面潛在影響,如引起細胞變形,影響DNA合成,抑制細胞生長等,往往被大多數實驗者忽視。
細菌:細菌污染后,培養基1-2天就會變色,對細胞生長影響明顯,應迅速將污染細胞與其它細胞系隔離,滅菌后丟棄,還要用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺。
病毒:由于病毒寄生生存,爆發后盡快和正常細胞隔離,丟棄處理,相對來說容易處理,對操作者威脅較大;盡管病毒污染的細胞不影響原代培養,但生產疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。
真菌(霉菌和酵母菌):真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了;目前沒有好的抑制方法,包括現在常用的兩性霉素,一旦污染容易反復爆發,尤其孢子很難殺滅。
非同種細胞:即細胞交叉污染,由于細胞培養操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。

TEL:0571-86139637

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